哺乳动物细胞蛋白表达体系可表达的蛋白大小范围通常在10 kDa到150 kDa之间。

杆状病毒-昆虫细胞表达系统能够表达具有完整生物学功能的蛋白质，适合容纳和表达较大的外源片段，是表达大片段DNA的理想选择。

虽然杆状病毒-昆虫细胞系统不具备哺乳动物细胞的所有翻译后修饰能力，但它能够进行一些基本的翻译后修饰，如糖基化和磷酸化，适合大多数功能研究和生产应用。

酵母表达系统兼具原核和高等真核系统的优点，具有培养条件普通、生长速度快、成本低、可进行蛋白翻译后加工、易获得可溶性活性重组蛋白等特点。

巴斯德毕赤酵母因其快速生长、商业化表达载体丰富和高效分泌表达的优点，成为酵母表达重组蛋白的优先选择。

原核蛋白表达系统（如大肠杆菌）具有快速、高产量、经济实惠等优势，适用于大规模蛋白生产。

可以采用密码子优化、改变表达宿主菌株、调整表达条件（如温度、培养基组分等）等方法来提高可溶性蛋白的表达水平。

在大肠杆菌表达系统中，部分外源蛋白可能会由于错误折叠而形成包涵体，主要原因包括外源蛋白的复杂结构或毒性。

1. 提高蛋白表达量：密码子优化可以显著提高外源基因在宿主细胞中的表达量，为后续的分离纯化等步骤提供便利。

2. 提高翻译效率：通过减少稀有密码子的使用，可以避免翻译过程中的瓶颈，提高整体的翻译效率。

3. 改善mRNA稳定性：优化后的mRNA二级结构更加稳定，有利于核糖体的结合和翻译过程的顺利进行。

为避免脱靶效应，可以通过以下几种方法：

   - 使用高特异性的Cas9变体。

   - 精确设计引导序列以尽量减少与非目标序列的相似性。

   - 在设计sgRNA时使用生物信息学工具预测潜在的脱靶位点并进行优化。

通过对sgRNA进行化学修饰（如在2'-OH位点进行修饰）可以提高其稳定性和活性。此外，优化sgRNA的设计以减少脱靶效应也有助于提高其效率。

特异性：确保siRNA序列特异性靶向目标基因，避免脱靶效应。

有效性：筛选具有高沉默效率的siRNA序列。

稳定性：优化siRNA序列以提高其在细胞内的稳定性和有效性。